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蛋白質測定方法的比較

來源:  類別:技術文章  更新時間:2009-03-12  閱讀

蛋白質的定量,是生物化學中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有以下幾種方法:定氮法、紫外吸收法、Lowry法(Folin-酚試劑法)、Bradford法(考馬斯亮藍法)、BCA法等:

定氮法比較繁復,但較準確,往往以定氮法測定的蛋白質作為其他方法的標準蛋白。
紫外吸收法簡便、靈敏、快速,不消耗樣品,測定后樣品仍能回收利用。缺點是準確度較差,干擾物質多,用標準曲線法測定蛋白質含量時,對于那些與標準蛋白中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質,有一定的誤差。
Lowry法是較早發展的一種靈敏的檢測方法,最低靈敏度為5微克,通常測定范圍20-250微克。優點是靈敏度高,缺點是費時較長,要精確控制操作時間,標準曲線不是嚴格的直線形式,且專一性差,干擾物質較多。
Bradford法是靈敏度更高的一種方法,優點有:靈敏度高,比lowry法高4倍左右,最低檢測達1-5微克;測定快速、簡便,染色穩定;干擾物質少。確點是用于不同蛋白質測定時有較大的偏差;仍有干擾,如SDS、去污劑、Triton x100等;標準曲線有輕微的非線性。

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