蜂產(chǎn)品中蛋白質的測定主要采用凱氏定氮法,其測定結果穩(wěn)定可靠,被廣泛采用。但其操作較繁雜,消化時間長,需蒸餾滴定,費時費力。本法通過改進消化條件,即采用過氧化氫2濃硫酸混合液為消化液,消化過程中滴加硝酸2高氯酸混合酸,縮短了消化時間。樣品中的蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱分解,生成的氨與硫酸反應生成硫酸銨,硫酸銨在堿性溶液中與次氯酸鹽生成一氯胺,在亞硝基鐵氰化鈉催化作用下與水楊酸生成藍色化合物,可在655 nm 波長下比色定量。

1 　試驗部分

1. 1 　儀器與試劑

定氮儀；可見分光光度計。顯色劑:稱取水楊酸5. 0 g ,加入水20 mL ,加入2 mol ·L - 1 氫氧化鈉溶液16 mL ,凱氏定氮儀；攪拌使之完全溶解,再取5. 0 g 酒石酸鉀鈉溶于少量水中,將上述溶液合并移入100 mL 容量瓶中,用水稀釋。次氯酸鈉溶液:取經(jīng)標定的次氯酸鈉溶液用氫氧化鈉溶液稀釋成含有效氯的質量濃度為3. 5 g ·L - 1 ,游離堿濃度為0. 75 mol ·L - 1 (以氫氧化鈉計) 。亞硝基鐵氰化鈉溶液:稱取亞硝基鐵氰化鈉(硝普鈉) 1. 0 g ,溶于少量純水中,并稀釋至100 mL ,質量濃度10 g ·L - 1 。氨氮標準溶液: 臨用時稀釋成質量濃度為1. 0 mg ·L - 1氨氮的標準工作溶液。試劑均為分析純,水為無氨去離子水。

1. 2 　試驗方法

1. 2. 1 　樣品處理

稱取樣品2. 0 g 于250 mL 定氮瓶中,加入硫酸銅0. 5 g ,硫酸鉀5. 0 g ,硫酸2過氧化氫(2 + 1) 混合液20 mL ;搖勻后于瓶口放一小漏斗,置于有石棉網(wǎng)的可調電爐上,小火加熱,至泡沫停止后,加大火力,緩慢分次滴加硝酸2高氯酸(4 + 1) 混合酸2～3 mL ,樣液變藍透明后,繼續(xù)加熱30 min ,取下放冷后,加水20 mL ,冷卻后分次洗入500 mL (蜂蜜消化液洗入250 mL) 容量瓶中。移取樣品消化液5. 0 mL 于另一個100 mL 容量瓶中,加水至刻度備用,同時作試劑空白。

1. 2. 2 　樣品分析

移取樣品溶液與試劑空白液2. 0～5. 0 mL ,1. 0 mg ·L - 1 氨氮標準工作溶液0 , 0. 50 , 1. 00 ,2. 00 ,4. 00 ,6. 00 ,8. 00 mL 分別于10 mL 具塞比色管中,往樣品管、試劑空白管及標準管中加顯色劑1. 0 mL ,10 g ·L - 1 亞硝基鐵氰化鈉溶液0. 2 mL ,3. 5 g ·L - 1 次氯酸鈉溶液0. 2 mL ,用水稀至刻度,混勻,靜置60 min 后,于655 nm 波長處,用1. 0 cm比色皿,測定其吸光度,繪制標準曲線,計算樣品溶液中蛋白質的含量。

2 　結果與討論

2. 1 　工作曲線

按試驗方法對標準系列溶液進行測定,氮的質量濃度在0～0. 8 mg ·L - 1 范圍內(nèi)呈線性關系,對試劑空白測定20 次,其3 倍的標準偏差為檢出限,其檢出限為0. 014 mg ·kg - 1 。

2. 2 　精密度試驗

取蜂王漿、花粉、蜂蜜樣品,按試驗方法進行6次測定,樣品測定值的相對標準偏差(RSD) 結果見表1 。

2. 3 　水楊酸法與凱氏定氮蒸餾法測定結果比較

隨機抽取了8 份峰產(chǎn)品樣品,分別用水楊酸法和凱氏定氮蒸餾法對樣品中蛋白質進行測定,測得結果經(jīng)t檢驗, t = 0 . 153 ,查t值表, t0. 05 (7) = 2 . 356 ,

 

所以P > 0. 05 ,兩方法測定蜂產(chǎn)品中蛋白質無顯著性差異。結果見表2 。

2. 4 　回收率試驗

取蜂王漿、花粉、蜂密樣品,加入氨氮標準溶液,按試驗方法進行樣品處理與測定,回收率測定結果見表3 。

通過改進蜂產(chǎn)品蛋白質消化的條件,有效地縮短了反應時間,由原來的3. 5 h 縮至2 h 左右。由于水楊酸光度法樣品消化液不需要蒸餾,直接用于測定,更適宜于批量樣品的測定,水楊酸光度法與國標法比較無顯著性差異,所以水楊酸光度法因其操作簡便、準確、迅速,可用于蜂產(chǎn)品中蛋白質的測定。