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水盤捕捉瓊脂培養(yǎng)法捕捉孢子操作過程

來源:  類別:技術(shù)文章  更新時間:2013-03-08  閱讀

  麥類赤霉病的流行具有暴發(fā)性和間歇性,準確地預測是搞好防治的基礎(chǔ)。赤霉病的預測預報主要從菌源、麥類生育期、氣候三方面進行調(diào)查和綜合分析。而菌源的調(diào)查又分地面稻樁帶菌率調(diào)查和空中孢子捕捉二類?罩墟咦硬蹲接定量風流孢子捕捉器風向器捕捉法、電動捕捉法和固定式捕捉法、水盤法等使用顯微鏡檢查孢子的方法。以上方法都很費時,且鏡檢技術(shù)難度大,往往不易查到孢子。1978年開始,我們在省農(nóng)科院植保所麥病組的幫助指導下進行水盤瓊脂培養(yǎng)法捕捉孢子的試驗。通過6年的試驗,初步認為該方法預測準確度高,且省工省力,簡便易行,適宜于縣級以上病蟲觀測站調(diào)查菌量作為短期預測依據(jù)使用。
  水盤捕捉瓊脂培養(yǎng)法操作過程
 。ㄒ唬┡囵B(yǎng)基的制備。將新鮮馬鈴薯(或番薯)洗凈去皮,用天平稱取200克,切成細顆粒狀,放入鋼精鍋內(nèi),加水1000毫升,作好標記,煮沸半小時,煮中間可加少量開水,使其總量不少于10的毫升。煮好后用4層紗布過濾,去渣,在馬鈴薯汁液內(nèi)再加瓊脂和白糖各20克,再煮沸使瓊脂全部溶化,中間加適量開水,以制備1000毫升培養(yǎng)基。待瓊脂、自糖全部溶化后,分裝在試管或三角燒瓶中,每管裝18一20毫升左右,試管和三角燒瓶口塞上棉花,包_曰由紙,在高壓鍋或普通鍋內(nèi)蒸煮消毒后待用。
 。ǘ┡囵B(yǎng)皿水盤誘苗。選擇不同類型的6丘小麥田,每丘放水盤1只。水盤系采用經(jīng)過開水消毒煮沸過的直徑為10厘米的培養(yǎng)皿,用特種鉛筆寫上號碼或在底座上貼上小標簽,用20毫升針筒注入無菌水,每個培養(yǎng)皿6一7毫升,使皿底鋪遍,于傍晚4時放到麥田誘菌臺上,次日上午8時取回。
  誘菌臺前選年用少_堆制,高度離地面80厘米左右,土堆頂上平放1塊15×15厘米的玻璃,上用3根小竹支撐一頂直徑為70厘米大笠帽作防雨罩。防雨罩高出地面130厘米。近2年改用舊毛竹上釘一木板,毛竹埋入土下50一60厘米,其它距離與上述相同。
  (三)菌落的塔養(yǎng)。取制備好的培養(yǎng)基試管經(jīng)煮溶后,放入溫水中使培養(yǎng)基慢慢冷卻,以不燙手為度。培養(yǎng)皿誘菌水中加入2滴硫酸雙氫鏈霉素(50萬單位硫酸雙氫鏈霉素加5、毫升蒸餾水,放在眼藥水瓶中備用),搖勻,再加入冷卻(45℃左右)的培養(yǎng)基,迅速在臺板玻璃上搖平搖勻,蓋上培養(yǎng)皿蓋,倒放在26℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3天。觀察計數(shù)玫瑰紅色茵落的數(shù)量。
  試驗結(jié)果和討論
  根據(jù)1978一1983年6年應用水盤瓊脂培養(yǎng)法捕捉空中孢子預測麥類赤霉病的結(jié)果,初步得出以下結(jié)論:
 。ㄒ唬┧P捕捉瓊脂培養(yǎng)法省工省力,方法較為簡便,比電動孢子捕捉器捕捉子囊孢子的方法(我站使用3年)優(yōu)越。它可根據(jù)赤霉病菌產(chǎn)生玫瑰紅色菌落的多少計數(shù),不用顯微鏡檢查,也不會漏掉捕到的孢子數(shù),消毒滅菌要求不高,即便有雜菌生長,也不影響檢查,因此易于普及推廣。
  (二)水盤瓊脂培養(yǎng)法用來捕捉空中孢子預測小麥赤霉病的準確程度高。根據(jù)統(tǒng)計分析,小麥始花期前10天和4月上旬平均每盤菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率的相關(guān)性達極顯著和顯著水準,對小麥赤霉病的短期預測有明顯的作用(表1)。而用電動孢子捕捉器捕捉,我們進行了3年,捕到孢子極少,根本無法預測;稻樁帶菌率調(diào)查進行了7年,初步認為稻樁帶菌率的高低與當年大田麥類赤霉病發(fā)生程度沒有相關(guān)性,故不能作為預測流行與否的根據(jù)。
  1. 小麥始花前10天平均每盤菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率關(guān)系,用6年資料統(tǒng)計分析結(jié)果,相關(guān)性極顯著(r=0.9563關(guān)關(guān))。
  表1水盤捕捉瓊脂培養(yǎng)法誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病程度的關(guān)系

表1水盤捕捉瓊脂培養(yǎng)法誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病程度的關(guān)系
  以y為小麥赤霉病穗發(fā)病率(%),x1為小麥始花前10天平均每盤菌落數(shù),其預測式為:
  y=0.09757x1一4.182±2.806
  根據(jù)該式判別小麥始花前10天平均每盤菌落數(shù)在100個以下的,小麥赤霉病為極輕年,一般不必進行第2次藥治;在100一250個的為輕發(fā)年,部分小麥田應治第2次,在250個以上的為中發(fā)年,應治第2次。所以該式可用于決定小麥是否需要進行第2次藥治。
  2. 4月上旬平均每盤菌落數(shù)與小麥赤霉病穗發(fā)病率關(guān)系,用6年資料統(tǒng)計分析結(jié)果,相關(guān)性達顯著水準(r=0.5225)。以y為小麥赤霉病穗發(fā)病率(腸),x1為4月上旬平均每盤菌落數(shù),其預測式為:
  y=0.1697x1一4.739±5.459
  我縣小麥始花期即第i次防治適期在4月15日左右,·所以該式可用來短期預測小麥赤霉病的發(fā)病程度,指導第1次防治工作。
  3. 根據(jù)6年水盤捕捉瓊脂培養(yǎng)法的試驗結(jié)果,其中5年孢子高峰日在小麥始花前后,這5年小麥發(fā)病都重于大麥;而1981年情況特殊,孢子高峰日與大麥齊穗期吻合,且4月12日開始幾乎沒有捕到孢子,所以1981年大麥穗發(fā)病率達5.7%,而小麥穗發(fā)病率僅0.78%。這對分析菌量和病害的關(guān)系很有說服力。
  3月21日至4月20日合計平均每盤誘菌量與小麥赤霉病發(fā)病率的關(guān)系,經(jīng)統(tǒng)計分析未達顯著水準,但相關(guān)性較好。1978一1981年4年誘菌量均在200個以下,病害發(fā)生為極輕年份;1982一1983年2年誘菌量在300個以上,病害發(fā)生為輕發(fā)到中等偏輕年份。

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